PCR-tunnistus
Polymeraasiketjureaktiossa (PCR) käytetään DNA-palaa templaattina, ja DNA-polymeraasin ja nukleotidisubstraatin osallistuessa DNA monistetaan riittävään määrään rakenteellista ja toiminnallista analyysiä varten. PCR-detektiomenetelmällä on erittäin tärkeä merkitys bakteeritartuntatautien kliinisessä nopeassa diagnosoinnissa.
PCR:n periaatetta käytetään kahden tunnetun sekvenssin välissä sijaitsevan DNA-fragmentin monistamiseen, joka on samanlainen kuin luonnollisen DNA:n replikaatioprosessi. Monistettavaa DNA-molekyyliä käytetään templaattina, ja alukkeina käytetään oligonukleotidifragmenttien paria, jotka ovat komplementaarisia templaatin 5'-päälle ja 3'-päälle. DNA-polymeraasin vaikutuksesta se seuraa templaattia puolivaratun replikaatiomekanismin mukaisesti. Ketjun pidentäminen uuden DNA-synteesin loppuun asti, toista tämä prosessi, kohde-DNA-fragmentti voidaan monistaa.
(PCR) on menetelmä spesifisten DNA-fragmenttien entsymaattiseksi syntetisoimiseksi in vitro. Se koostuu useista vaiheista korkean lämpötilan denaturaatiosta, matalan lämpötilan hehkutuksesta ja sopivasta lämpötilan pidentämisestä. Ominaisuudet, kuten korkea herkkyys, helppokäyttöisyys ja ajansäästö. Sitä voidaan käyttää perustutkimuksen, kuten geenieristyksen, kloonauksen ja nukleiinihapposekvenssianalyysin lisäksi myös sairauksien diagnosoinnissa tai missä tahansa paikassa, jossa on DNA:ta ja RNA:ta. Polymeraasiketjureaktio (lyhyesti Polymerase Chain Reaction, PCR) tunnetaan myös soluvapaana molekyylikloonauksena tai spesifisenä DNA-sekvenssinä in vitro alukeohjattu entsymaattinen monistustekniikka.
DNA:n puoliksi varattu replikaatio on tärkeä tapa biologiselle evoluutiolle ja kulkeutumiselle. Kaksijuosteinen DNA voidaan denaturoida ja sulattaa yhdeksi juosteeksi useiden entsyymien vaikutuksesta. DNA-polymeraasin ja promoottorin osallistuessa kaksijuosteinen DNA voidaan replikoida samoihin kahteen molekyyliin komplementaarisen emäsparin periaatteen mukaisesti. Kokeissa havaittiin, että DNA voidaan denaturoida ja sulattaa myös korkeissa lämpötiloissa, ja se voidaan renaturoida uudelleen kaksoisjuosteiksi, kun lämpötilaa lasketaan. Siksi kontrolloimalla DNA:n denaturaatiota ja renaturaatiota lämpötilan muutoksilla ja suunnittelemalla alukkeita promoottoreiksi DNA-polymeraasin ja dNTP:iden lisääminen voi saattaa päätökseen spesifisten geenien replikaation in vitro.
Yksinkertainen asia on käyttää erikoislaitteita, käyttää dNTPS:tä, Mg2+, spesifisiä alukkeita, DNA-polymeraasia ja puskurijärjestelmää, lisätä templaattia, joka on DNA-näyte in vitro -monistukseen, ja suorittaa elektroforeesi. Jos se voidaan vahvistaa ja vahvistetun tuotteen koko on yhdenmukainen kohdekaistan kanssa, se tarkoittaa, että aluke ja templaatti ovat spesifisiä ja havaitsemisindeksi on positiivinen.
PCR-nukleiinihapon havaitsemismenetelmät ja -vaiheet
Nukleiinihappotestaus vaatii viisi vaihetta: näytteenotto, näytteen säilyttäminen, retentio, nukleiinihappojen uutto ja tietokonetestaus.
Nukleiinihappojen havaitseminen
Ensimmäinen askel on kerätä ihmisen eritteet ja pyyhkiä nenäontelo tai nielun takaseinä ja molemminpuoliset nielurisat nenätestillä tai nielutestillä.
Toisessa vaiheessa lääkintähenkilöstö säilytti näytteen, upotti koekappaleen pään solunsäilytysliuokseen ja ruuvaa putken korkin kiinni välittömästi hännän murtumisen jälkeen.
Kolmannessa osassa näyte laitetaan ilmatiiviiseen pussiin, säilytetään ja lähetetään tarkastettavaksi ajoissa.
Neljäs vaihe on lähettää näyte laboratorioon nukleiinihapon uuttamiseksi.
Viidennessä vaiheessa uute alistetaan fluoresoivalle PCR-amplifikaatioreaktiolle.
Tarvitset myös tarvikkeita ja välineitä
PCR-laite, PCR-putki, pipetin kärki, syväkuoppalevy, säiliö ja reagenssit lisätty
