Kuten sanonta kuuluu, jos työntekijä haluaa tehdä hyvää työtä, hänen on ensin teroitettava työkalunsa. Kulutustarvikkeiden valinta on erittäin tärkeää tyydyttävien PCR-koetulosten saamiseksi. PCR-tuloksia analysoitaessa keskitymme usein alukkeiden, entsyymipitoisuuden, lämpötilan ja ajan analysointiin, mutta jätämme huomiotta, että myös PCR-kulutusaineet ovat yksi vaikuttavista tekijöistä. PCR-tarvikkeita on monenlaisia, kuinka valita oikeat PCR-kulutustarvikkeet? Tässä on muutamia kysymyksiä, jotka auttavat sinua löytämään vastauksesi.
pcr-kulutustarvikkeet
1. Miksi PCR-kulutustarvikkeet on yleensä valmistettu PP:stä?
Olipa kyseessä tavallinen PCR tai reaaliaikainen fluoresenssikvantitatiivinen PCR (qPCR), yleensä sen kulutusosat ovat suorassa kosketuksessa reagenssien tai näytteiden kanssa, joten tuotanto- ja valmistusprosessissa tarvitaan korkealaatuisia materiaaleja ja hyviä prosessointitekniikoita. Yleiset kulutusosat on valmistettu polypropeenista (PP). Polypropeeni (PP) on biologisesti inertti materiaali, pinta ei tartu helposti biomolekyyleihin ja sillä on hyvä kemiallinen kestävyys ja lämpötilansieto.
2. Kuinka valita PCR-putket/levyt eri tilavuuksilla?
PCR-putkien/levyjen yhteiset tilavuudet:
• Yksi putki/{{0}}putki/12-putki: 0,5 ml, 0,2 ml, 0,1 ml
• {{0}}kuoppalevy: 0,2 ml, 0,1 ml
• {{0}}kuoppalevy: 0,02 ml
PCR-putkien/levyjen tekniset tiedot:
Valitse sopiva tuote erityisten kokeellisten vaatimusten mukaan. Useimpien PCR-putkien tilavuus voi täyttää PCR-reaktioiden vaatimukset. Kapasiteettitiedot ovat saatavilla vakiokapasiteetilla ja pienellä kapasiteetilla. Yleensä on suositeltavaa valita ensin pienikapasiteettiset putket. Koska pienitilavuuksisissa reaktoriputkissa/levyissä on vähemmän tilaa, lämmönsiirto paranee ja haihtuminen vähenee. Samanaikaisesti näytteitä lisättäessä on vältettävä lisäämästä liikaa tai liian vähän näytettä. Liian suuri määrä voi johtaa lämmönjohtavuuden heikkenemiseen, läikkymiseen ja ristikontaminaatioon, kun taas liian vähän voi aiheuttaa näytteen haihtumishäviöitä.
3. Mitä eroa on yhden putken tai 8-riviputken litteällä/kuperalla kannella?
Kun näytetilavuus on pieni, yksi putki tai {{0}}putki on parempi. Kuitenkin, kun reaktiotilavuustarve on suuri, vallitsevat yksittäiset putket ja tilavuus voi olla 0,5 ml. On olemassa kahdenlaisia yksiputki- ja 8-putkiputkia, joissa on litteä kansi ja kupera kansi. Kummallakin on omat etunsa. Litteä kansi tarjoaa tarkan fluoresoivan signaalin toimituksen qPCR:lle; helppo kirjoittaa tusseihin. Kupera kansi on kosketuksessa PCR-instrumentin kanteen vähentämään paineen aiheuttamaa putken muodonmuutosta; se vaikuttaa kuitenkin fluoresoivien signaalien lähetykseen, eikä sitä voida soveltaa qPCR-kokeisiin.
4. Mitä eroja on eri 96-kuoppalevyjen käyttöskenaarioissa?
96-kuoppalevyt jaetaan yleensä ei-helmalevyihin, puolihelmalevyihin ja täyshelmalevyihin.
Jalustattomat levyt: Yhteensopiva useimpien lämpösyklilaitteiden tai qPCR-laitteiden kanssa, mutta ei sovellu automatisoituihin sovelluksiin. Vakaus ei ole korkea pipetoinnin aikana, ja sitä on käytettävä levytelineen kanssa.
Puolihamelevy: Se voidaan sovittaa merkitsemään tai lisäämään viivakoodia ja automaattista levitystä, ja sillä on hyvä pipetointivakaus.
Koko helmalevy: sopii erittäin hyvin automatisoituihin laboratoriosovelluksiin, mutta sopii myös tarroihin ja viivakoodisovelluksiin. Hyvä mekaaninen lujuus, sopii PCR-koneisiin, joissa on ulkonevat moduulit, ja korkea stabiilisuus pipetoinnin aikana.
5. Onko PCR-levy/putkimateriaali paksumpaa ja vakaampaa?
ei. PCR-tarvikkeiden seinämän paksuuden on oltava tasainen tasaisen lämmönsiirron varmistamiseksi. Erittäin ohut putken seinämä on 50 prosenttia ohuempi kuin vakioversio, mikä voi edelleen vähentää lämpösulkua, mikä johtaa nopeampaan ja parempaan vasteeseen.
6. Miksi 96-kuoppa- tai 384-kuoppalevyjen leikatut kulmat ja etiketit eivät ole samat?
Kulman leikkaus: PCR-levyn kulmaleikkausasennon valinta riippuu mukautetun instrumentin vaatimuksista helpon paikantamisen kannalta.
Tunnistus: Aakkosnumeeriset merkinnät PCR-levyillä auttavat tunnistamaan yksittäiset kuopat ja näytepaikat. Yleensä se on korotettu värillinen numerologo tai kaiverrettu logo. Joissakin automaattisissa levityskokeissa reaktiolevy, jossa on painettu merkinnät, on paremmin sinetöity.
7. Jotkut PCR-levyn kuopat ovat ulkonevia, kun taas toiset ovat litteitä. Kumpi on parempi?
Se mikä sopii on hyvää. Tavallisia PCR-levyjä on kahta tyyppiä: tasaiset kuopan reunat ja kohotetut kuopan reunat. Reaktiolevy tasaisella kaivon reunalla, sopii useimpiin lämpöpyöräilijöihin. Nousuputken reiän reunassa oleva reaktiolevy on kätevä tiivistykseen, mikä voi vähentää näytteiden välisen ristikontaminaation riskiä.
8. Kuinka valita erivärisiä PCR-putkia/levyjä?
Tavallisiin PCR-reaktioihin voidaan käyttää läpinäkyviä reaktioita. Reaaliaikaisessa PCR-reaktiossa valkoisen putken herkkyys ja konsistenssi ovat suhteellisen korkeampia. Valkoiset putken seinämät estävät fluoresenssia kulkemasta putken seinämien läpi ja taittamasta, mikä estää fluoresenssia kulkemasta lämmitysmoduuliin, absorboitumasta moduuliin tai heijastamasta epäjohdonmukaisesti. Verrattuna läpinäkyviin putkiin, valkoisten putkien yläosaan voidaan kerätä voimakkaampia ja keskittyneempiä fluoresenssisignaaleja.
