PCR-tekniikka on samanlainen kuin DNA:n luonnollinen replikaatioprosessi, ja sen spesifisyys perustuu oligonukleotidialukkeisiin, jotka ovat komplementaarisia kohdesekvenssin molemmille päille. PCR koostuu kolmesta perusreaktiovaiheesta: denaturaatiosta, pariutumisesta ja pidentämisestä. Tämä reaktioprosessi suoritetaan PCR-reaktiosäiliössä. Geenimonistuslaitteen jatkuvan kehityksen myötä reaktiosäiliö on myös kokenut sentrifugiputken asteittaisen kehittymisen 1,5 ml:sta 0,2 ml:aan (0,25 ml) ohutseinämäiseksi {{ 7}},2 ml omistettu PCR:lle. , 0.1 mlpcr putki. PCR-monistusreaktioiden määrän lisääntyessä muodostuu vähitellen suuritehoisia geenin monistussäiliöitä PCR-liuskoja ja PCR-levyjä varten.
PCR koostuu kolmesta perusreaktiovaiheesta: denaturaatio-pariutuminen-pidennys
Templaatti-DNA:n denaturaatio:
Kun templaatti-DNA:ta on kuumennettu noin 94 asteeseen tietyksi ajaksi, templaatti-DNA:n kaksijuosteinen DNA tai PCR-monistuksella muodostunut kaksijuosteinen DNA dissosioituu, jotta se voidaan yhdistää alukkeen kanssa valmistukseen. seuraavaa reaktiokierrosta varten.
Templaatti-DNA:n liittäminen (renaturaatio) alukkeilla:
Sen jälkeen kun templaatti-DNA on denaturoitu yhdeksi juosteeksi kuumentamalla ja lämpötila on laskettu noin 55 asteeseen, alukkeet paritetaan templaatti-DNA:n yhden juosteen komplementaarisen sekvenssin kanssa.
Pohjamaalien pidennys:
Taq:n vaikutuksesta DNA-templaatti-alukekonjugaatti käyttää dNTP:tä reaktion raaka-aineena uuden puolivaratun replikaatioketjun syntetisoimiseksi, joka on komplementaarinen templaatti-DNA-ketjulle emäsparin ja puoliksi varatun replikaation periaatteen mukaisesti.
PCR-tekniikan perusperiaatteet
Tekniikka perustuu DNA-polymeraasin entsymaattiseen synteesireaktioon templaatti-DNA:n, alukkeiden ja neljän deoksiribonukleotidin läsnä ollessa.
DNA-polymeraasi käyttää yksijuosteista DNA:ta templaattina aloittaakseen synteesin pienellä kaksijuosteisen DNA:n palalla. Yksi tai kaksi synteettistä oligonukleotidialuketta yhdistetään komplementaarisen sekvenssin kanssa yksijuosteisessa DNA-templaatissa osittaisen kaksijuosteisen DNA:n muodostamiseksi.
Sopivassa lämpötilassa ja ympäristössä DNA-polymeraasi lisää deoksimononukleotidiä alukkeen 3'-OH-päähän ja käyttää tätä aloituskohtana templaatin 5'→3'-suunnassa jatkettaessa uuden DNA:n komplementaarisen juosteen syntetisoimiseksi.
Ero PCR-putkien ja sentrifugiputkien välillä
PCR-putket:
PCR-reaktiolevy on 96-kuoppa tai 384-kuoppa, joka on erityisesti suunniteltu panosreaktioihin. Periaatteena on, että PCR-koneen ja sekvensserin suorituskyky on yleensä 96 tai 384.
Sentrifugiputki:
Sentrifugiputki ei välttämättä ole PCR-putki. Sentrifugiputkia on monenlaisia kapasiteetin mukaan. Yleisesti käytetyt ovat 1,5 ml, 2 ml, 5 ml, 15 tai 50 ml, ja pienintä (250 ul) voidaan käyttää PCR-putkena.
Kuinka valita PCR-putket
Valitsimme PCR-putkien sijoittamisen toivoen, että voimme valita lämpötilan tarkimman sijainnin.
Tarkimman lämpötilan sijainnin tulee olla moduulin alla olevan lämpötila-anturin yläpuolella (riippumatta anturin epätarkista lämpötilasta).
Eri PCR-laitteiden lämpötila-anturin asento on erilainen.
Esimerkiksi AB:n 2720:ssa on vain yksi keskellä, MJ:n 200:ssa on kolme anturia, jotka ovat alhaalla vasemmalla, keskellä ja ylhäällä oikealla, Eppendorfin pitäisi olla rivillä A tai H ja Dongshenglong 811:ssä on kolme lämpötila-anturia, B{{3} } tulee valita , C1-2, C6-7, D6-7, B11-12, C11-12, koska nämä pisteet ovat lämpötilan täsmällisiä pisteitä.
