Kuten me kaikki tiedämme, laboratoriossa viljellyt solutyypit voidaan karkeasti jakaa kahteen tyyppiin: kiinnittyviin soluihin ja suspensiosoluihin, ja molemmissa tiloissa on vain muutamia solutyyppejä.
Suspensiosolut viittaavat solutyyppiin, jotka voivat kasvaa suspendoituneessa tilassa väliaineessa ilman tukia, kuten lymfosyyttejä ja useimpia verijärjestelmästä peräisin olevia soluja. (kuten hiiren leukemiasolut WEHI-3, ihmisen leukemiasolut K-562, HL-60). Teollisuudessa yhä enemmän kiinnittyviä soluja on kesytetty ja viljelty täyssuspensiossa. Tällä hetkellä SP2/0-, NS0-, CHO-, BHK- ja HEK293-soluja käytetään pääasiassa teollisuudessa, ja niitä käytetään pääasiassa rekombinanttiproteiinien tuotantoon; eläinlääkinnällisissä biologisissa tuotteissa yleisesti käytettyjä passage-soluja ovat pääasiassa BHK21-solut, jotka on viljelty täyssuspensiossa, MDCK-solut; ja Vero-solut, PK-solut, ST-solut, Marc145-solut jne. mikrokantajasuspensioviljelmän avulla, jokaisella solulla on erilaiset ominaisuudet.
Suspensiosolut
Ripustussolut "thp-1" 200x
Yleensä suspensiosoluja on helpompi käsitellä kuin kiinnittyviä soluja, koska suspensiosolujen läpikulkuun ei tarvita trypsinointia. Mutta tämä ei tarkoita, että suspensiosoluja olisi helpompi kasvattaa kuin kiinnittyviä soluja. Aloittelijoille se on haastavampaa. Aina on erilaisia ongelmia: esimerkiksi miksi kuolleita soluja ja solujen erilaistumista ilmaantuu aina; sovitaan, että kulku on helppoa, mutta tuloksena on erottuminen; ongelmat ilmenevät uudelleen kylmäsäilytyksen ja toipumisen jälkeen!
Seuraavaksi keskustellaan joistakin keskeisistä kohdista suspensiosolujen ~ viljelyyn
Kohta 1: Tarpeeksi kärsivällisyyttä, se on erittäin välttämätöntä
Monilla suspensiosoluilla on suhteellisen huono elinkelpoisuus, kun ne on juuri otettu talteen kylmäsäilytyksestä. Tällä hetkellä meidän on oltava tarpeeksi kärsivällisiä odottaaksemme, että solut korjaavat itsensä ja siirtyvät logaritmiseen kasvuvaiheeseen. Esimerkiksi THP-1 (ihmisen monosyyttinen leukemia) tarvitsee usein 7-10 päivää toipumisjakson sulamisesta normaaliin lisääntymiseen; Jurkat, Klooni E6-1 (ihmisen T-lymfosyyttiset leukemiasolut) tarvitsevat myös 5-7 päivää toipumisen jälkeen. Palaa tilaan ennen jäätymistä. Aloittelijat voivat lopettaa harjoittelun tänä aikana, joten ole kärsivällisempi! Tällaisten solujen viljely on myös kärsivällisyyden kasvatusprosessi!
Kohta 2: Tartu inokulaatiotiheyteen
Yleisesti ottaen suspensiosolujen tiheys ei saa olla pienempi kuin 500,000/ML. Monet suspensiosolut ovat tiheydestä riippuvaisia, ja matalan tiheyden aiheuttama ei-proliferaatio on myös yksi yleisimmistä ongelmista aloittelijoille. Tietenkin on hyvin vähän soluja, joiden tila huononee tiheyden ollessa korkea, kuten W6/32 (hiiren B-soluhybridoomasolut). Siksi on erittäin tärkeää etsiä asiaankuuluvaa tietoa solujen ominaisuuksien ymmärtämiseksi ennen tuntemattomien solujen viljelemistä. Vain tuntemalla itsesi ja vihollisen voit voittaa kaikki taistelut!
Väliaineen vaihdon tiheyttä ei pitäisi rajoittaa "selvästi". Solut ovat eläviä olentoja. Jatkuvan viljelysyklin aikana spesifisiä ravinteita, kuten lisäelatusainetta ja glukoosia, voidaan lisätä useita kertoja riippuen solujen kasvutilasta solujen hyvän kasvutilan ylläpitämiseksi. . Suspensioviljelyprosessin aikana solujen lisääntyessä, ravinteiden kulutuksessa alkuperäisessä elatusaineessa ja aineenvaihduntatuotteiden lisääntyessä solujen elinkelpoisuus heikkenee ja oikea-aikainen ravinteiden lisäys tekee soluista suhteellisen hyvän elinympäristön. En mene tässä yksityiskohtiin, ja vältän toistuvaa sentrifugointia ja nesteen vaihtoa.
Puhutaanpa nesteen korvausmenetelmästä:
①Täyden nesteen keskipakovaihtomenetelmä
Eli poista kaikki vanha elatusaine sentrifugoimalla (800-1000rpm, 5 min) ja vaihda uuteen väliaineeseen. Tämä menetelmä soveltuu "ihokiinteiden" hyvin kohotettujen suspensiosolujen (kuten K562) korvaamiseen tai nykyiseen tilanteeseen, jossa solut ovat hyvässä kunnossa ja tiheys on korkea, mikä johtaa suureen väliaineen kulutukseen. Tämän menetelmän etuna on, että alusta vaihdetaan perusteellisesti ja osa solujäännöksistä voidaan poistaa, mutta se aiheuttaa myös jonkinasteista mekaanista vauriota soluille.
② Keskipakopuolivaihtomenetelmä
Eli sentrifugoimalla (800-1000rpm, 5 min) 50-prosenttinen solususpensio korvaa 50 prosenttia tuoreesta alustasta. Tämä menetelmä sopii vertaamaan "tekopyheitä" vaikeasti viljeltäviä soluja (kuten thp-1) tai tilannetta, jossa tiheys on pieni, mutta säätötilassa on poistettava enemmän roskia.
③ Sedimentaationesteen vaihtomenetelmä
Toisin sanoen sentrifugin sijaan käytetään painovoiman avulla tapahtuvaa luonnollista sedimentaatiomenetelmää elatusaineen erottamiseen soluista, jotta tuore väliaine korvataan kokonaan tai osittain. Sillä on kuitenkin käyttörajoituksia - se sopii vain soluille, jotka voivat muodostaa tietyn kokoisia soluklustereita (muuten ne eivät asettu luonnollisesti ja niitä voidaan sentrifugoida vain alhaisella nopeudella), varsinkin kun on kyse soluista, joiden lisääntyminen riippuu solujen aggregaatiosta. , kuten NK-92, NK- 92 MI, Jurkat. Tällä menetelmällä voidaan minimoida sentrifugointiprosessin aiheuttamat mekaaniset vauriot nesteenvaihtoprosessin aikana säilyttäen samalla aggregoituneen solumassan ja solujätteen poisto on suhteellisen perusteellista.
Yllä olevien kohtien hallitsemisen ja hyvän solun siemenen jälkeen on aivan nurkan takana kasvattaa "kauniita" suspensiosoluja!
soluviljelylevy
Yongyue Medicalin U-muotoista soluviljelylevyä käytetään enimmäkseen suspensiosolujen viljelyyn käyttämällä lääketieteellistä polystyreeniä (PS), joka on valmistettu 100:n 000-tason puhdistuspajassa, steriloitu säteilytyksellä, ei sisällä DNaasi-, RNaasi- ja pyrogeenejä. -ilmainen , Turvallisuus ja ympäristönsuojelu.
Soluviljelylevyjä on saatavana eri eritelmillä erilaisten bakteeriviljelmien tarpeisiin. Tuotetyypit on jaettu 6-well, 12-well, 24-well, 48-well, 96-well ja 384-well, of joka 96-kaivo on jaettu tasapohjaiseen, U-pohjaiseen ja V-pohjaiseen pohjaan; U-muotoisia viljelylevyjä käytetään enimmäkseen suspensiosolujen viljelyyn; V-muotoisia viljelylevyjä käytetään enimmäkseen immunologisiin hemagglutinaatiokokeisiin.
