PCR-kahdeksanputken sarjan puhdistusmenetelmä ja huomion toteutuminen

Meidän on pestävä PCR-kahdeksanputken sarja käytön jälkeen. PCR Octal Kit voidaan puhdistaa muutamalla tavalla. Mihin minun tulisi kiinnittää huomiota, kun käytän sitä?

Kokeellisen menetelmän periaate: Piidioksidigeelikalvo sitoutuu DNA: han korkean suolan olosuhteissa ja erottuu DNA: sta vähäsuolaisissa olosuhteissa. Alukkeet, mononukleotidit, entsyymit, mineraaliöljy, suolaionit jne.

Kokeelliset materiaalit: PCR-tuotteet, reagenssit, sarjat, PCR-puhdistussarjat, instrumentit, kulutustarvikkeet, 96-kaivon DNA-valmistuslevyt, 96-kaivolevyt, 96-kuopan V-muotoiset levyt

1. PCR-kahdeksanputken valmistaja puhuu sarjan koostumuksesta, varastoinnista ja vakaudesta

1. Ohjeet, kulutustarvikkeet: 96-kaivo DNA-valmistelulevy, 96-hyvin 1,6 ml syväkaivolevy, 96-kaivon V-muotoinen levy.

2. Puskuri PCR-A: DNA:ta sitova liuos. Säilytä tiiviisti suljettuna huoneenlämmössä. Jos saostuu, se liuotetaan lämpimään kylpyyn 65 °C:ssa ja jäähdytetään huoneenlämpöiseksi ennen käyttöä.

3. Puskuri W2-konsentraatti: poista suolaliuos. Ennen käyttöä lisätään etanoli pullossa määritettyyn tilavuuteen, sekoitetaan hyvin ja säilytetään huoneenlämmössä. 100% etanolia tai 95% absoluuttista etanolia voidaan käyttää.

4. Eluetti: 2,5 mM Tris-HCl, pH 8,5, säilytetään suljetussa tilassa huoneenlämmössä.

2. KAHDEKSAN KYTKETYN PCR-putkien valmistaja puhuu toimintavaiheista

Käyttäjät voivat valita alipaineen tai sentrifugoinnin.

A. Vastapaineen menetelmä

1. Kytke alipainelaite oikein, aseta 96-kuopan DNA-valmistelulevy alipainelaitteeseen; lisätään PCR-testiin 3 kertaa puskuri PCR-A, entsyymien mädätys, entsyymimerkintä tai sekvensointireaktioliuos (jos puskuri-PCR-A on alle 100 μl, lisätään 100 μl); sekoitetaan hyvin ja siirretään 96-kaivon DNA-valmistelulevyyn, kytke virta päälle ja säädä alipaine -25-30 tuumaaHg: iin ja aspiroi hitaasti liuos levyssä.

2. Lisätään 0,3 ml puskuria W2 ja absorboidaan liuos. Pestään kahdesti 0,3 ml:lla puskuria W2 samalla tavalla.

Vahvistetaan absoluuttisen etanolin lisääminen ilmoitettuun puskuri-W2-konsentraatin tilavuuteen reagenssipullossa.

3. Säilytä alipaine ja poista 96-kuopan DNA-valmistelevy 10 minuutin ajan.

4. Jauhaa 96-kuopan DNA-valmistelevy 6 kertaa pitkään kuitukudokseen viemäriputken ollessa alaspäin.

5. Aseta 96-kaivon DNA-valmistelulevy 96-kaivon V-muotoiselle levylle, lisää 25-30ul vettä tai eluoidaan kalvon keskelle ja anna seistä 1 minuutti huoneenlämmössä. DNA:ta eluoitettiin sentrifugoimalla 3 000 x g:ssa 5 minuutin ajan.

B. Keskipako

1. Lisätään 3 tilavuusosaa buffer PCR-A:ta (jos puskuri-PCR-A on alle 100 μl, lisätään 100 μl) PCR-, mädätys-, entsyymimerkintä- tai sekvensointireaktioihin; sekoitetaan ja siirretään 96-kuopan DNA:han 96-kuopan valmistelevyssä. DNA-valmistelevy asetetaan 96-kuopan 1,6 ml:n syvään kaivolevyyn, sentrifugoidaan 1000 x g:n tarkkuudella 1 minuutin ajan ja suodos heitetään pois.

2. Lisätään 96-kuopan DNA-valmistelevyyn 0,3 ml puskuria W2, sentrifugoidaan 1000×g: ssa 1 minuutin ajan ja hävitä suodos. Pestään uudelleen samalla tavalla 0,3 ml:lla puskuria W2. Vahvistetaan absoluuttisen etanolin lisääminen ilmoitettuun puskuri-W2-konsentraatin tilavuuteen reagenssipullossa.

3. Aseta 96-kuopan DNA-valmistelevy 96-kaivon 1,6 ml:n syväkaivolevyyn ja sentrifugoidaan 3 000× g:n tehoon 10 minuutin ajan.

4. Aseta 96-kuopan DNA-valmistelulevy puhtaaseen 96-kaivon V-muotoiseen pohjalevyyn, lisää 25-30ul vettä tai eluoi kalvon keskelle ja anna seistä 1 minuutti huoneenlämmössä. DNA:ta eluoitettiin sentrifugoimalla 3 000 x g:ssa 5 minuutin ajan.

PCR-oktaaliputkien valmistajat puhuvat asioista, joihin on kiinnitettävä huomiota:

1. Eluentin tai veden kuumentaminen 65 °C:seen voi auttaa parantamaan eluutiotehokkuutta.

2. DNA-molekyylit ovat happamia, on suositeltavaa säilyttää 2,5 mM Tris-HCl: ssä, pH 8, 5 eluaatissa.