1. Toipuminen
●1. Ota kryovial pois nestetypestä, laita se välittömästi 37-asteiseen vesihauteeseen ja ravista kevyesti. Kun neste on sulanut (noin 1-1,5 minuuttia), ota se pois ja suihkuta alkoholia ja aseta se erittäin puhtaalle työpöydälle.
●2. Imu yllä oleva solususpensio 15 ml:n sentrifugiputkeen, joka on täytetty 10 ml:lla elatusainetta (pese kylmäsäilytysputki elatusaineella kaikkien seinämään kiinnittyneiden solujen pesemiseksi) ja sentrifugoi 1000 rpm:llä 5 minuuttia.
●3. Kaada supernatantti pois ja lisää 1 ml väliainetta solujen suspendoimiseksi. Aspiroidaan 10 cm:n petrimaljaan, joka sisältää 10 ml viljelyalustaa, ja ravisteltiin varovasti edestakaisin, jotta petrimaljassa olevat solut jakautuvat tasaisesti.
●4. Merkitse solutyyppi ja päivämäärä, kultivaattorin nimi jne. ja aseta se CO2-inkubaattoriin viljelyä varten. Kun solut ovat kiinnittyneet seinään, vaihda väliaine.
●5. Vaihda väliaine 3 päivän välein.
2. Kulkeminen
●1. Passointi, kun solupeitto viljelymaljassa saavuttaa 80 prosenttia -90 prosenttia.
●2. Imu alkuperäisestä materiaalista.
●3. Lisää sopiva trypsiini (vain sen verran, että solut peittyvät) ja sulata 1-2 minuuttia.
●4. Kun solut on pyöristetty, lisää yhtä suuri määrä seerumia sisältävää väliainetta hajotuksen lopettamiseksi.
●5. Suspendoi solut pipetillä pipetoimalla.
●6. Imu solut 15 ml:n sentrifugiputkeen ja sentrifugoi nopeudella 1000 rpm 5 minuuttia.
●7. Kaada supernatantti pois, lisää 1-2ml elatusainetta ja puhalla solut.
●8. Siirrä solut useille astioille solutyypistä riippuen. Yleensä on 5 syöpäsolua ja 3 normaalia solua. Jatka viljelyä.
3. Kryosäilytys Pilko solut ja sentrifugoi (ibid.). Suspensoi solut valmiiseen pakastusliuokseen ja jaa ne steriloituihin kryovialeihin, anna niiden seistä muutama minuutti ja merkitse solutyyppi ja kylmäsäilytyspäivämäärä. 4 astetta 30 minuuttia, -20 astetta 30 minuuttia, -80 astetta yön yli ja sitten laitettu nestetyppeen säilytystä varten. Kylmäsäilytysliuoksen valmistus: 70 prosenttia täydellistä alustaa plus 20 prosenttia FBS:a plus 10 prosenttia DMSO:ta. DMSO tulee lisätä hitaasti tipoittain ravistaen samalla tippuen.
