Seerumipullon käyttö
Seerumipullo on valmistettu heikosti uuttuvasta borosilikaattilasista, ja väritön kirkas pullo täyttää USP Type I:n ja ASTM E 438 Type I Standard Class A:n vaatimukset. Sitä voidaan autoklavoida 121 asteessa 20 minuutin ajan ja se voidaan jakaa 125 ml:aan. , 250ml, 500ml, 1L, 2L tilavuuden mukaan.
Seerumipullo on seerumin säilytysastia, joka on yleensä valmistettu PET-materiaalista ruiskevenytyspuhallusprosessilla. Väliaine on solujen kasvuun tarvittava ravintoaine. Lähteensä mukaan se jaetaan synteettiseen väliaineeseen ja luonnolliseen väliaineeseen, joita molempia voidaan säilyttää seerumipulloissa.
Seerumipullo
Luonnollinen väliaine:
Yleisimmin käytetty luonnollinen väliaine on seerumi, pohjimmiltaan vasikan seerumi. Seerumi sisältää erilaisia solujen kasvutekijöitä, adheesiota edistäviä tekijöitä ja niiden monivaikutteisia aineita. Yhdessä synteettisen väliaineen kanssa solut voivat lisääntyä ja kasvaa tasaisesti. Seerumi on säilytettävä erityisissä seerumipulloissa -5 asteesta -20 asteeseen.
Synteettinen väliaine:
Synteettinen alusta on tiukasti formuloitu solujen tarvitsemien aineiden tyypin ja määrän mukaan. Tyyppejä ja komponentteja on monia, mikä helpottaa koeolosuhteiden hallintaa. Sisältää hiilihydraatteja, aminohappoja, lipidejä, epäorgaanisia suoloja, vitamiineja, hivenaineita ja solujen kasvutekijöitä. Luonnolliseen väliaineeseen verrattuna joitain luonnollisia tuntemattomia komponentteja ei kuitenkaan voida korvata tunnetuilla kemiallisilla komponenteilla. Siksi soluviljelmässä käytettävään synteettiseen peruselatusaineeseen on lisättävä myös tietty määrä luonnollisia alustakomponentteja synteettisen viljelmän voittamiseksi. Riittämätön pohja, yleisin käytäntö on lisätä vasikan seerumia.
Seerumipullon muoto on neliömäinen, helppo tarttua, kestää useimpia happo- ja alkalikorroosiota, haurastumislämpötila on -70 astetta, ja sillä on edelleen tietty sitkeys -30 asteessa. Se on hyvä pakkaussäiliö, olipa kyseessä luonnollinen väliaine tai synteettinen viljelmä. voidaan säilyttää seerumipulloissa.
Ihmisen napanuoraveren endoteelisolujen eristämiseen, viljelyyn ja tunnistamiseen sekä soluttomien vaskulaaristen tukirakenteiden perustamiseen parannetulla jäädytys-sulatusmenetelmällä
Tutkia ihmisen napanuoraverestä eristettyjen ja viljeltyjen endoteelisolujen toteutettavuutta ja kliinistä käyttöarvoa.
Menetelmät: Napanuoraveri sikiöistä, joille tehtiin täysiaikainen keisarileikkaus Bengbu Medical Collegen ensimmäisen osasairaalan synnytys- ja gynekologian osastolla, kerättiin ja asetettiin seerumipulloon, joka sisälsi 50U/ml hepariinia aseptisissa olosuhteissa, säilytetty 4 asteen jäälaatikossa ja kuljetettu soluihin Viljelyhuoneessa napanuoraveren mononukleaarisolut saatiin tiheysgradienttisentrifugoinnilla. Saadut mononukleaariset solut jaettiin kahteen osaan ja lisättiin vasikan sikiön seerumi-M199-elatusaine (FCS-M199) ja autologinen seerumi-M199-elatusaine (AS-M199). Ja ne kylvettiin viljelymaljoille ihmisen fibronektiinin (HFN) kanssa ja ilman (merkitty: F(0), F(1), A(0), A(1)). In vitro -induktio, erilaistuminen ja ekspansio suoritettiin.
Kiinnittyneiden solujen morfologisia muutoksia koko induktio- ja erilaistumisprosessin aikana tarkkailtiin ja ne tunnistettiin eri näkökulmista yhdistettynä niihin liittyviin tekniikoihin, kuten immunohistokemiaan, immunofluoresenssiin ja virtaussytometriin.
Tulokset: 12 päivän viljelyn jälkeen napanuoraveren mononukleaarisolut alkoivat kiinnittyä. 3d:n jälkeen karan muoto alkoi näkyä, ja sitten kiinnittyneiden solujen määrä kasvoi vähitellen ja muuttui vähitellen karan muotoiseksi. Kun viljellään korkeintaan viikon ajan, muodostui tyypillinen pesäke, jossa solut ympärille ja pyöreät solut keskellä. Kun soluja viljeltiin 14 päivää, toisiinsa liittyvät soluklusterit yhdistyivät vähitellen ja muodostivat verkkomaisen rakenteen. Samaan aikaan viljelyajan jatkuvan pidentymisen myötä myös pitkät karasolut alkoivat vähitellen lyhentyä ja osoittivat tyypillistä päällystekiveä muistuttavaa muutosta.
Kiinnittyneitä soluja viljeltiin viikon ajan ja havaittiin, että solujen määrä ihmisen fibronektiiniä sisältävässä alustassa oli merkittävästi suurempi kuin ilman ihmisen fibronektiiniä, eikä solujen lukumäärässä ollut merkittävää muutosta kahdessa eri alustassa.
