Polymeraasiketjureaktio (PCR) on yksi tunnetuimmista menetelmistä life science -laboratorioissa.
PCR-levyt on valmistettu ensiluokkaisesta muovista kerättyjen näytteiden tai tulosten erinomaiseen käsittelyyn ja analysointiin.
Niissä on ohuet, tasaiset seinät, jotka tarjoavat tarkan lämmönsiirron.
Valmistettaessa reaaliaikaista käyttöä varten pienet DNA- tai RNA-fraktiot eristetään ja varastoidaan PCR-levyille.
PCR-levyt ovat erittäin tehokkaita kuumasaumauksessa ja rajoittavat myös lämmön virtausta.
Koska PCR-levyt ovat kuitenkin tehokkaita ja luotettavia, ne ovat alttiita virheille ja epätarkkuuksille näytteitä käsiteltäessä.
Joten jos olet kiinnostunut hankkimaan laadukkaita PCR-levyjä. On parasta ottaa yhteyttä luotettavaan PCR-levyjen valmistajaan. Tämän avulla voit olla varma, että saat parhaan hinnan.
Alla on joitain varotoimia reagenssien tai näytteiden kontaminoitumisen ja virheellisten tulosten estämiseksi.
Desinfioi ympäristö
Epäpuhtauksista johtuvat väärät positiiviset tai negatiiviset tulokset voivat saada sinut epäilemään tuloksia.
Epäpuhtaudet ja epäpuhtaudet tulevat eri muodoissa, kuten toisiinsa liittymättömänä DNA:na tai kemiallisina lisäaineina, jotka lopulta vähentävät reaktion tehokkuutta ja tehokkuutta.
On monia tapoja vähentää huomattavasti PCR-levyjen kontaminaationopeutta.
Steriloitujen suodatinkärkien käyttäminen on toinen hyödyllinen tapa estää epäpuhtauksien pääsy näytteeseen pipetin kautta.
Täysin puhdas laitesarja, mukaan lukien pipetit ja telineet, toimitetaan erityisesti PCR-käyttöön. Tämä takaa mitättömän epäpuhtauksien tai epäpuhtauksien siirtymisen laboratorion ympärille.
Käytä valkaisuainetta, etanolia pipeteissä, telineissä ja penkeissä epäpuhtauksien pyyhkimiseen.
Varaa tilaa kaikille PCR-reaktioille hiukkaskontaminaation vähentämiseksi entisestään.
Käytä puhtaita käsineitä joka vaiheessa ja vaihda ne usein.
PCR-levy
Tarkista mallin pitoisuus ja puhtaus.
PCR:llä näytteiden analysointiin käytettävien penkkien ja laitteiden puhtaus on säilytettävä. On erittäin tärkeää varmistaa näytteiden puhtaus ennen analysointia ja käsittelyä.
Tyypillisesti analysaattori ottaa huomioon DNA-näytteen pitoisuuden ja puhtaustason.
Absorbanssisuhteen 260nm/280nm ei tulisi olla pienempi kuin 1,8. Epäpuhtaudet tunnistettiin sitten käyttämällä aallonpituuksia välillä 230 nm ja 320 nm.
Yhdessä esimerkissä kaotrooppisia suoloja ja muita orgaanisia yhdisteitä havaittiin 230 nm:n absorbanssilla. Samanaikaisesti havaitse ja tarkista sameus DNA-näytteistä absorbanssilla 320 nm:ssä.
Vältä PCR-levyjen ja -tuotteiden ylikuormittamista
Vaikka on toivottavaa käyttää useita tuotteita samanaikaisesti, se voi johtaa PCR-levyjen ristikontaminaatioon.
PCR-levyjen ylikuormittaminen erilaisilla tuotteilla on tuhlausta ja vaikeuttaa näytteiden tunnistamista.
Pidä kirjaa PCR-reagenssieristä
Jatkuvat jäädytys/sulatussyklit ja toistuva erien käyttö voivat vahingoittaa PCR-reagensseja, entsyymejä ja DNTP:itä uudelleenkiteytymisen vuoksi.
Pyri aina seuraamaan käytettyjen alikvoottien määrää valmisteltaessa näytteitä analyysiä varten.
Edullinen LIMS soveltuu paremmin pakastettavien tai sulatettavien reagenssien ja näytteiden varastojen ja määrien kontrollointiin.
Valitse optimaalinen hehkutuslämpötila.
Väärän hehkutuslämpötilan valinta ja käyttö on toinen tapa, jolla PCR-tulokset sisältävät virheitä.
Joskus vastaus ei mene suunnitelmien mukaan. Hehkutuslämpötilaa on alennettava onnistuneen reaktion edistämiseksi.
Lämpötilan alentaminen lisää kuitenkin väärien positiivisten tulosten ja alukedimeerien mahdollisuutta.
PCR-levyjä käytettäessä on tärkeää varmistaa sulamiskäyrän analyysi, koska se on hyvä indikaattori oikean hehkutuslämpötilan valinnassa.
Primer-suunnitteluohjelmisto auttaa suunnittelussa ja tarjoaa oikean hehkutuslämpötilan, mikä vähentää suoraan PCR-levyjen virheitä.
pcr levy
