4 syytä kontaminaatioon PCR-kokeiden aikana

Jan 26, 2022 Jätä viesti

Uuden koronaviruksen puhkeamisen vuoksi PCR-geenienvahvistuslaboratorioiden rakentaminen eri paikkoihin on vähitellen kiihtynyt. Viruksen nukleiinihapon havaitseminen on tärkeä standardi uuden sepelvaltimopneumonian diagnosoinnissa. PCR-laboratorio, joka tunnetaan myös nimellä geenien monistuslaboratorio, ottaa käyttöön molekyylibiologian tekniikan. Vahvistamalla nukleiinihappofragmentteja sitä voidaan pitää myös erityisenä nukleiinihapon replikaationa in vitro. Geenien seurantajärjestelmää käytetään ihmiskehon viruspitoisuuden ymmärtämiseen, ja havaitsemistarkkuus voi saavuttaa nanometritason. Uusi koronaviruksen nukleiinihapon havaitseminen kuuluu myös tähän teknologialuokkaan ja on tärkeä standardi uuden sepelvaltimopneumonian diagnosoinnissa.

PCR-geeninvahvistuslaboratorio vahvistaa pääasiassa havaitsemisnukleiinihappomallia. Voidaan havaita, että ristikontaminaatio tapahtuu todennäköisimmin laboratoriossa, mikä johtaa vääriin positiivisiin tuloksiin testinäytteissä. Siksi PCR-laboratorioilla on tiukat suunnitteluvaatimukset ja standardit.

Nyt PCR-tekniikkaa on käytetty laajalti tartuntatautien, kasvainten kohdentamisen, lisääntymisgenetiikan jne. Tällä tekniikalla testattavan nukleiinihapon moninkertaisen ja suuren vahvistuksen vuoksi jopa hyvin pieni määrä kontaminaatiota voi helposti johtaa toiseen, PCR: ään Tekniset vaatimukset ovat suhteellisen korkeat ja kokeellinen prosessi on monimutkainen. Jos välilinkeissä on puutteita, voi syntyä vääriä negatiivisia tuloksia.

1. Se on PCR-vahvistustuotteiden saastuminen. Se on myös yleisin saastumisen syy. PCR-tuotteiden toistuvan vahvistamisen jälkeen replikaation määrä ylittää huomattavasti PCR: n havaitsemisrajan, joten jopa hyvin pieni määrä kontaminaatiota riittää aiheuttamaan vääriä positiivisia tuloksia kokeellisissa tuloksissa.

2. Reagenssikontaminaatio. Reagenssin valmistuksen aikana kosketus saastuneisiin säiliöihin, pipetteihin, pipettikärkiin, liuoksiin jne., Voi johtaa reagenssien saastumiseen.

3. Testattava näyte on saastunut. Säiliö, johon näyte on sijoitettu, on saastunut tai näyte on saastunut säiliön huonon sulkemisen vuoksi; toiseksi saastuneiden pipettien tai pipettikärkien käyttö nukleiinihapon uuttamisprosessin aikana johtaa näytteen saastumiseen; Lisäksi jotkut näytteet sisältävät viruksia, jos ne leviävät ilmaan, ristikontaminaatiota voi esiintyä.

4. Aerosolien saastuminen. Jos aerosoli sisältää viruksia ja muita epäpuhtauksia ja leviää ilmaan, se aiheuttaa hyvin todennäköisesti PCR-tuotteen kontaminaatiota. Aerosolit syntyvät ilman ja nesteen pinnan välisestä kitkasta. Kannen avaaminen, reaktioputken ravistaminen ja kontaminaationäytteenottimen toistuva hengittäminen voivat muodostaa aerosoleja, jotka voivat johtaa ristikontaminaatioon. Laskennan jälkeen yksi aerosolihiukkanen voi sisältää 48 000 osaa, joten erityistä huomiota on kiinnitettävä aerosolin aiheuttamaan saastumiseen. Niin kauan kuin PCR-laboratorio on saastunut, edellinen tulosraportti on pätemätön eikä muita kokeellisia toimenpiteitä voida suorittaa. Saastumisen lähde on tunnistettava ja poistettava perusteellisesti tarkkojen ja tehokkaiden kokeellisten tulosten saamiseksi.